SPE固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物源食品中的氯霉素

前言

氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染，后因对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高，也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集，用高效液相色谱质谱仪进行检测。

本文参考“农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法”采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定氯霉素的回收效果，实验证明，氯霉素回收率在90.2%~99.5%之间，重现性RSD为3.5%，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。

关键词：氯霉素，SPE1000全自动固相萃取系统，液相色谱串联质谱， 

1实验过程

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统（向日葵小视频色版网站公司）；

SCIEX 4500 液相色谱串联质谱（SCIEX）；

氯霉素，100 mg/L，坛墨质检；

氯霉素D5，100 mg/L，坛墨质检；

氯化钠（分析纯）；

正己烷（色谱纯）；

乙酸乙酯（色谱纯）；

乙腈（色谱纯）；

C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL向日葵小视频色版网站）；

实验用水：超纯水。

1.2标准工作液的配制

取1 mL氯霉素标品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

取100 μL 的氯霉素标准储备液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL标准工作液。

取1 mL氯霉素D5标品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

取100 μL 的氯霉素D5标准储备液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL标准工作液。

1.3试验方法

1.3.1样品准备

取均质后的样品5g置于50mL离心管中，加入内标200μL，氯霉素标液200μL,加入乙腈5mL，4%氯化钠5mL，涡旋2min，4000rad/min离心10min，取上清液至另一个50mL离心管中，重复提取一次，合并提取液。提取液中加入正己烷5mL，涡旋2min，2000rad/min离心10min，弃去上层清液，重复一次，加入水饱和乙酸乙酯5mL，涡旋1min，2000rad/min离心10min，将上层液转移到15mL离心管中，重复提取一次，合并提取液氮吹至干，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，备用。

同时做样品空白，加入内标200μL，剩下同样品处理 。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至干，用1 mL流动相定容。

图1   氯霉素的SPE富集方法

1.3.3 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素

液相条件：

色谱柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm； 

流    速：0.2 mL/min ；

进样量：5 μL；

流动相：乙腈：水=40:60;

MS条件：

气帘气~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  喷雾电压-4500V

表1  氯霉素母离子/子离子(定量例子152.0)

2试验结果

2.1牛肉中氯霉素色谱图

2.1.1牛肉中氯霉素标品色谱图

图2为取200 μL的氯霉素标准工作液和200μL氯霉素内标工作液，用流动相定容到1.0 mL检测，氯霉素标品出峰色谱图，出峰时间为 1.50min。

图2  氯霉素标品出峰色谱图

2.1.2牛肉中氯霉素样品色谱图

图3氯霉素加标样品出峰色谱图，出峰时间为1.50min，图4为空白样品色谱图。

图3  氯霉素加标样品出峰色谱图

图4   空白样品色谱图

2.2 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素回收率

液质测定牛肉中氯霉素回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在之间90.2%~99.5%，重现性RSD为3.5%。

表2  牛肉中氯霉素的加标回收率（加标量4 ug/kg）

3结果与讨论

SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率在90.2%~99.5%,重现性为3.5%，准确度与平行性良好且自动化效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。

参考文献

农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法